恒煊娱乐平台-登录蒙大拿大学的研究人员在《Science》发表了关于细菌如何引起感染的新见解，可能有助于未来的抗感染治疗。 研究对象不是细菌，而是感染病毒的噬菌体，作为国家卫生研究院资助项目的一部分，帮助开发细菌感染疫苗。“噬菌体通常被视为细菌寄生虫，”该论文的合着者助理教授Patrick Secor说。由于耐抗生素的细菌流行率越来越高，利用噬菌体（噬菌体疗法）替代抗生素杀死致病细菌的研究逐渐升温。噬菌体多种多样，被认为是地球上最普遍的生物实体。“当我们寻找感染致病菌铜绿假单胞菌的噬菌体时，我们发现大多数菌株都感染了一种名为Pf的噬菌体，但这种噬菌体不会杀死它们的细菌宿主，”Secor说。当Secor和斯坦福大学的研究人员在人体伤口中寻找Pf噬菌体时，他们惊讶地发现了大量丝状噬菌体——平均每个拭子上有100万个Pf噬菌体。Secor课题组以前研究过噬菌体是如何影响细菌毒性的。“因此，我们问，这些Pf噬菌体是否可能直接与人体免疫系统相互作用？”他们与斯坦福大学的合作者一起发现，Pf噬菌体被免疫细胞识别为了病毒，识别冷病毒的细胞表面受体同样也可以识别噬菌体。“这是一个关键的发现，”Secor说。“这些噬菌体诱导了抗病毒反应，但是面对细菌感染，这是一种不适当的免疫反应。”研究人员认为，这种不适当的免疫反应使细菌在伤口或肺内获得“掩护”，从而建立感染。研究人员希望，他们的发现可以刺激新研究，通过靶向感染细菌的噬菌体发展控制感染的有效策略。
噬菌体展示应用相关载体设计的关键：1 相互结合位点的选择在蛋白酶底物噬菌体展示中，一个关键的组分是亲和性结构域，它使我们可以将底物序列和非底物序列区分开。这其中包括蛋白—蛋白相互作用、蛋白—肽段相互作用以及多组氨酸与镍螯合基质的结合。整合这几种不同的系统的要素在于，展示系统是基于高亲和性相互作用而设计的。通常，相互结合的两个物质之间的解离常数（Kd）应该至少在一个较低的nmol/L的数量级上，这样在实验中复合物的解离速度就可以比蛋白酶解的速度慢得多。例如，我们以往在这个领域中的工作中，利用的是一个hGH的高亲和性变异体，此变异体与其受体的Kd值约13pmol/L。然而，对于蛋白酶底物噬菌体展示库，挑选在适当的缓冲液条件下（例如低pH或高pH）能够被破坏的这种相互作用，将有助于选择性地富集非底物序列（被捕获而结合于固体支持物上）和最佳的底物序列（被蛋白酶解而释放）。另外一个必须考虑的是靶蛋白酶（或者其他的一些噬菌粒形成中可能碰到的蛋白酶）必须不会酶切亲和性结构域。由于这个原因，亲和性结构域一般都是一个稳定的球蛋白或者一个短的肽段。2 底物卡匣（cassette）的设计和构建底物噬菌体展示要成功，一个关键在于切割仅仅发生在亲和性（捕获）结构域和噬菌粒之间。幸运的是，丝状噬菌体对蛋白酶解有极强的抗性：在所有已知的蛋白酶中，只有枯草杆菌蛋白酶能够引起噬菌体外膜蛋白的显著降解。为使底物序列更易与蛋白酶作用，在附近的连接序列中引入一定部分柔韧性（segmental flexibility）的设计要谨慎。例如，底物序列GPGG（X）。GGPG位于亲和性结构域和pⅢ基因之间，柔韧的甘氨酸—脯氨酸接头分布于随机序列的两端。在我们的实验中，已经证实截短形式的pⅢ蛋白是有效的，但另外也有报道使用全长pⅢ蛋白也能取得成功。在多价底物噬菌体展示中，一个全长pⅢ蛋白对于感染是必需的。一些其他的重要因素也主导着文库卡匣的设计，包括随机化的密码子、密码子的选择以及文库的大小，这些在第2章中有详细的描述。在许多情况下，我们不可能穷尽含有8个或8个以上的残基的整个底物序列所有可能的排列。然而，在文库仅展示了一部分可得到的序列的情况下，我们也有可能得到关于底物特异性的相关信息。例如，要构建一个包含5个密码子的随机文库，可以先列举其中2个密码子的序列，以此作为参照序列；从中得到的信息可用于第二次的文库构建，即将此两个密码子固定，再列举另外3个密码子和（或）其他的扩展的底物序列。作为替代，可以通过整合已知的特异性决定因素并查明那些现在还较不清楚的因素，从头设计一个更集中的文库。
开学季又到了实验汪又要去“搬砖”了如何优雅的搬砖还不用求助师兄师姐当然是关注“小奥课堂”栏目啦今天小奥为各位介绍的 是一篇干货满满的 噬菌体展示方法实践手册 “噬菌体的扩增与定量” 这是一份难得的学霸笔记 请收好（收藏）！ Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、全人源转基因小鼠发现平台进行有效对接，能够广泛用于抗体、抗体偶联药物和CAR-T/TCR-T等领域。本文将针对噬菌体展示技术的噬菌体增殖和扩增实验细节进行探讨、分享具体实验过程的经验，以其原理为根本来指导实验过程，以精益求精的实验过程，增加噬菌体展示技术在抗体发现过程中的成功率。Part 2 ——噬菌体文库 扩增及展示的基本原理 现在普遍应用的噬菌体展示抗体片段的体系称之为“3+3体系”（3为噬菌体的p3衣壳蛋白）；3+3代表着p3衣壳蛋白有两个来源：噬菌粒（phagemid）M13KO7辅助噬菌体(Helper Phage）菌粒（phagemid）上的p3蛋白融合了抗体片段的基因，是文库多样性的关键；辅助噬菌体(Helper Phage)上的p3蛋白为噬菌体天然的p3蛋白。*噬菌粒是一种比较小的质粒载体，在大肠杆菌感受态中有较高的转化效率，并且能够在大肠杆菌中扩增。 含有噬菌粒的大肠杆菌被辅助噬菌体(Helper Phage)感染后，会利用大肠杆菌的酶系统、原料和能量进行扩增,最终包含噬菌粒的噬菌体从大肠杆菌释放出来，该子代噬菌体的p3衣壳蛋白会展示抗体片段。Part 3 ——在噬菌体扩增过程中 遇到的难题和对应的解决方案 噬菌体的建库过程实际上是抗体片段基因多样性的传递过程： 从血样中抗体基因的多样性传递到噬菌粒的过程，是噬菌粒文库构建的内容； 从噬菌粒的多样性传递到含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性，是噬菌粒质粒电转大肠杆菌的内容； 从含有噬菌粒的大肠杆菌的多样性传递到噬菌体的多样性则是噬菌体扩增的内容，也是本文实验经验关注的问题。噬菌体的扩增最终目的是将噬菌粒中单一拷贝的抗体片段基因通过噬菌体的扩增过程变成10-100个拷贝，且这些拷贝基因能够在噬菌体表面的p3蛋白上展示出抗体蛋白片段。在噬菌体的扩增过程要使得文库的多样性得以保持和传递，需根据文库的初始大小确定在扩增过程中含有噬菌粒的大肠杆菌的数目和体积，对应加入的辅助噬菌体的多少进行有效感染，以及扩增后加入多少含有噬菌粒的噬菌体进行淘选等需要一一计算评估的问题，不同文库大小的噬菌体库在扩增过程中需要的扩增体积是不一样的。一份固化的实验方案很有可能会导致文库多样性的丢失。 要弄清楚这些问题，首先要具备以下几点基础的前置知识：（??以下内容全部划重点！！！）1. TG1大肠杆菌在OD600的读数：1OD代表的菌浓度为1e9个/ml。2. 噬菌体/辅助噬菌体在TG1处于对数生长期时有比较好的感染效率，TG1处于对数生长期的OD600值在0.4-0.8。3. TG1在对数生长期的生长速度是20分钟一代，需要密切关注TG1的生长，及时取菌进行实验。4. 辅助噬菌体和TG1的比值MOI在20：1时能够保证所有TG1被感染上。5. 含有噬菌粒的噬菌体能够感染正常的TG1大肠杆菌，并将噬菌粒留在TG1中并随着TG1的扩增进行扩增，在无辅助噬菌体的情况下无噬菌体的扩增。6. 噬菌粒质粒含有青霉素抗性，辅助噬菌体含有卡那霉素抗性。7. 含有噬菌粒的噬菌体可以通过感染正常的TG1，梯度稀释涂青霉素抗性的琼脂板进行滴度测定。8. 3+3模式下含有噬菌粒的噬菌体展示出p3融合抗体片段蛋白的效率比较低，只有5%-10%,在进行淘选时，加入的噬菌体的滴度应是文库多样性的100倍以上。 还有一个比较关键的问题是噬菌体作为一种病毒，很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境，从而感染F因子阳性的大肠杆菌。 （心疼一下生物汪，冒着生命危险搬砖啊！） 在噬菌体展示的相关实验需要在相对封闭的实验室进行以避免噬菌体对于大肠杆菌的污染，特别是在培养正常的TG1大肠杆菌时。噬菌体的灭活方式通常是紫外照射半小时以上。（合格的生物汪，是个莫得感情的病毒杀手！） Part 4 ——噬菌体扩增和定量 具体实验过程的分享 以下是以一个文库大小为1E9的噬菌体文库进行扩增的实验方案。*如果文库过大或者过小，可依比例增减扩增体积。 Day 1（搬砖秃头的第一天）1. 取含有噬菌粒的TG1菌种1ml (菌数目为1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培养基250ml摇瓶中，使用奥豪斯摇床37度220rpm摇菌摇床至OD600为约0.5。2. 取OD600为约0.5的菌液20ml (菌数目为1E10),按照MOI为20：1加入pfu为2E11的辅助噬菌体M13 K07，37度220rpm振荡半小时进行感染。3. 取感染后菌液到50ml离心管使用奥豪斯离心机5816R 3200g离心10分钟，去除培养基，以除去培养基中的葡萄糖对噬菌粒中p3蛋白融合了抗体片段蛋白表达的抑制。4. 用2xYT-AK培养基重悬菌团，将培养基加至400ml，用1L摇瓶在30度220rpm过夜摇菌。 Day 2（搬砖秃头的第二天）5. 将400ml菌液均分至大的离心瓶中，使用奥豪斯离心机5816R 10000g离心10分钟，取上清，10000g再次离心10分钟，去除残留的菌体碎片。6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中，在4℃孵育1小时并伴随着柔和的振荡，然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃10000g离心1小时。7. 去上清，用10mlPBS重悬噬菌体后，加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.8. 冰上孵育20分钟，然后使用带低温控制功能的奥豪斯离心机5816R 4℃ 10000g离心半小时。9. 去上清液，用吸水纸吸干残留的PEG溶液，加入1-2ml的PBS重悬噬菌体，进行滴度测定。滴度测定：1. 在分隔的实验室，取正常的TG1大肠杆菌加入2xYT的培养基中，使用奥豪斯摇床摇菌至OD600值为0.5，如未能及时使用，可放入4℃ 2小时以备用。2. 将步骤9中扩增噬菌体原液用PBS稀释1E5-1E7倍。3. 取10ul噬菌体稀释液加入490ul OD600为0.5的TG1大肠杆菌中，使用奥豪斯摇床 37℃ 220rpm振荡半小时进行感染。4. 取感染液50ul均匀涂抹在含有2xYT-GA的琼脂板中，晾干后放入37℃培养箱过夜。并将未感染TG1大肠杆菌涂抹琼脂板作为阴性对照。 Day 3（搬砖秃头的第三天）5. 数2xYT-GA的琼脂板中的克隆数，根据稀释倍数计算扩增噬菌体的滴度 噬菌体滴度(pfu/ml)=（克隆数*10*50/10ul）*稀释倍数6. 取1E11-1E12的噬菌体用于淘选。试剂配方：2xYT培养基：Yeast Extract 10.0 g/L+Tryptone 16.0 g/L+NaCl 5.0 g/L2xYT-GA培养基: 2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+ 1% （W/V）葡萄糖2xYT-AK培养基：2xYT培养基+100 μg/ml 青霉素+50 μg/ml卡那霉素PEG溶液：20% (w/v) PEG 6000, 2.5 M NaCl Part 5仪器推荐：（做科研民工的每一天都不孤单，因为有小奥陪伴）噬菌体作为一种病毒，很容易以气溶胶的形式扩散到空气中污染实验室的环境，需要封闭的实验室，实验室所有的仪器需单独使用。奥豪斯恒温轻负载培养摇床转速范围为100-12—rpm,体积集约，功能强大，可为您的样品提供优异的摇荡效果：此外，噬菌体展示实验的过程中会有不同体积、不同转速和需要4℃条件的离心步骤，如果以多 台离心机满足实验的需求会造成实验设备资产的空置，造成极大的浪费！！！奥豪斯5816R多功能离心机和可选转子为噬菌体相关实验提供便利，一台离心机满足所有实验需求！接下来，小奥带你乘坐“帮你省科研经费”这辆车教你正确薅奥豪斯的羊毛 德国原装进口功能强大、离心效果优异的奥豪斯Frontier™ 离心机家族 推出“买一赠一”促销活动促销型号如下微量高速离心机FC5515R（冷冻型号）微量高速离心机FC5515（非冷冻型号）全新紧凑型微量离心机FC5513现在上车，还来得及哦！详情请联系奥豪斯哦！ 想了解更多关于奥豪斯Starter™ 系列产品信息？请进入「阅读全文」留下信息，我们的专业工程师将火速赶来，为您服务！ ▼
p近日，中国科学院深圳先进技术研究院的研究团队在国际权威学术期刊Microbiome(《微生物组》)上发表最新研究，首次证实了人体肠道噬菌体组和糖尿病的关联性，为应用噬菌体干预肠道菌群，以及预防和治疗某些疾病提供了依据。/pp噬菌体是一类专一感染细菌的病毒，作为细菌的天敌，2014年被美国国立卫生研究院列为对抗耐药菌武器之一，同时也是人体肠道微生物组的重要组成部分。肠道噬菌体种类丰富、数量巨大，通过塑造肠道菌群结构，进而影响人体健康。但是，人们目前对于噬菌体的认识还非常匮乏。/pp论文作者首次利用已有的人体肠道微生物大数据，开发了一系列生物信息学方法，挖掘其中的噬菌体基因组序列，鉴定了大量的全新肠道噬菌体，揭示了肠道噬菌体组的多样性和新颖性。通过对这些噬菌体基因组序列的分析，科研人员发现这些噬菌体携带大量的功能基因，这些基因和宿主细菌在肠道环境中的生存适应性相关。/pp研究显示糖尿病患者的肠道细菌菌群组成变化和糖尿病有着显著的相关性。由于噬菌体—细菌之间是捕食者—被捕食者的关系，通常认为糖尿病人肠道菌群的变化会影响噬菌体的组成差异。但是，科研人员首次发现了肠道噬菌体的数量在糖尿病患者肠道中的数量显著高于对照组，经过进一步分析发现肠道细菌和噬菌体之间存在复杂的关系网络，细菌与噬菌体之间不是简单的“此消彼长”的关系。/pp据介绍，这个工作成果连同近期其他实验室发在《细胞》上的工作成果，都暗示着噬菌体—细菌—宿主两两之间存在着相互作用，这种关系有可能影响着人体的健康。未来，解析这些关系将是该领域的研究热点。/p
双十一结束小奥的购物车都清空了没法儿给你抄了我借ELISA实践笔记给你抄快到期末/年底了实验汪们可要抓紧搬砖咯前面三份笔记拉到文末看哦以下，可都是尖货儿哟！??Part 1 —— 前 言 ELISA方法用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是最为广泛的高通量的抗体发现的筛选方法，其实质是亲和力测定方法的一种变种，其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法，用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点：1.待测样本极具多样性，且单一样品通常也是混合物，有很大的可能存在非特异吸附；2.不同的待测样品之间可能存在较大的浓度差异，浓度的大小和亲和力的大小均会对检测结果产生影响。在进行杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发时，需要选择合适的条件使信号值主要能够表征亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响。本文是ELISA定量测定方法开发和亲和力测定方法开发的进阶版本，配体受体反应的基本原理解析，和两种应用的差异性区分是进行ELISA筛选方法的开发的基础。 Part 2 - 原理解析 - ELISA信号值和亲和力大小的关系 无论是进行杂交瘤的筛选还是噬菌体展示的筛选，其化学原理的实质是抗体和抗原可逆的相互作用，John McCafferty在Phage Display of Peptides and Proteins A Laboratory Manual一书的第七章节Phage Display：Factors Affecting Panning Efficiency中对可逆反应的数学原理有过理论的推导和实验的验证，简而概之可以用下面的公式进行描述：Abinput代表可逆反应中抗体的加入量，Aginput 代表可逆反应中抗原的加入量，Kd代表Ab和Ag的亲和力大小。由公式可知，当反应完成时，形成的抗原抗体偶联物占抗体的加入量的比值（proportion bound），是一个与抗原的加入量和亲和力大小这两个参数相关的特征函数。具体在ELISA测定过程中当抗体的加入量是恒定值时，proportion bound可以用检测的信号值来等价表示，在ELISA反应中抗原的加入量和Kd将决定信号的大小。相同浓度的抗体，因为亲和力不一样，在同一抗原浓度下其proportion bound的比例也不一样，用具体的图形演示如下图：红色实线随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线随抗原浓度变化其proportion bound的函数曲线，绿色虚线为在相同抗原浓度下，Ab1/ Ab2 proportion bound的比值。在抗原浓度为10nM的条件下，90%的Ab1(Kd=1nM)和50%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物，作为ELISA检测的信号值，Ab1，Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上1.8倍的信号差异；在抗原浓度为1nM的条件下，50%的Ab1(Kd=1nM)和9.1%的Ab2(Kd=10nM)能够形成抗体抗原偶联物，作为ELISA检测的信号值，Ab1，Ab2亲和力10倍的差异反应到ELISA信号值上5.5倍的信号差异；在加入的抗体浓度是相同的情况下，加入反应的抗原的浓度越少，ELISA信号比值的差异和抗体亲和力比值的差异更具相关性。抗原的浓度决定了ELISA筛选方法的选择性！以上是关于杂交瘤和噬菌体展示筛选理论状态的推导，也是ELISA筛选结果出来了做出客观解读的理论依据，在实际的筛选应用过程中由于不同的待测抗体样品之间可能存在较大的浓度差异。在抗原浓度较高的情况下ELISA信号差异很多情况下由于抗体样品的浓度差异导致的，ELISA信号值对于亲和力大小不具有选择性；只有在抗原浓度较低时，信号值主要能够表征抗体亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响，而在ELISA方法开发时当抗原浓度较低时，相对于抗原浓度较高时，其ELISA信号值要弱很多，提升ELISA方法信号的灵敏度，如何通过优化酶联抗体的浓度，挑选显色液和选择显色时间以增强ELISA检测的信号值是一个有区分度的ELISA筛选方法的关键。当ELISA检测的信号值得到提升时，由于筛选样品复杂性，往往其背景信号也会极大的提升，如何通过封闭液，酶标板材等降低背景信号值，得到好的信噪比是一个高质量的ELISA筛选方法的另一个关键。Part 3 - 实例分享 - ELISA用于噬菌体展示筛选布 局——————(Note 1)一 般 操 作 流 程1.酶标板的制备取浓度为100 ug/ml抗原，室温溶解，混匀用包被液按如下步骤稀释至0.2ug/ml，0.5ug/ml，1ug/ml，按加样布局表加入100ml/孔，分别加入酶标板条中 (Note 2)，其中加入包被液做包被抗体的空白对照，2-8℃过夜。2.用洗涤液洗板3次，拍干，加入300ml/孔封闭液(Note 3)室温封闭1小时；洗涤液洗板3次，拍干待用；3.取出包含有阴性对照和阳性对照过夜孵育制备含有噬菌体的深孔96孔板，在奥豪斯高速离心机中2000g离心15min，取上清，稀释10倍，一一对应加入包被好酶标板中。(Note 4)4.放入奥豪斯微孔板振荡器内 (如ISLDMPHDG- 30391935)，设置37℃、600rpm振荡1小时； 5.用洗涤液洗板3次，拍干；6.抗M13 p8酶联抗体稀释到合适的浓度（Note 5），在漩涡混合器上（如VXMNFS-30392112）混匀，100ul/孔。7.放入微孔板振荡器内，设置37℃、600rpm振荡1小时； 8.用洗涤液洗板4次，拍干；9.取酶联抗体对应的TMB显色液，临用前20分钟拿出平衡到室温，在漩涡混合器上混匀；（Note 6）10.使用8道排枪以100 ml/孔加入TMB显色液；11.显色液室温避光放置10-30分钟 （Note 7）；12.使用8道排枪以100ml/孔加入终止液终止反应；13.用酶标仪测定信号值；14.结果分析（Note 8）。Note1：由于不同的噬菌体样品有不同的亲疏水性，其对酶标板材的非特异吸附强度不一样，做一块没有抗原包被的阴性对照板是十分有必要的。Positive和Negtive是和样品有同样噬菌体制备过程，Positive Stock为早已经制备好的分装保存的阳性噬菌体，前者目的是监控在不同时间内噬菌体样品制备过程的差异，后者是监控在不同时间内ELISA检测操作的差异。Note2：在包被过程中，建议选择疏水性酶标板材（polysorp）,这样可以极大的减少背景信号值，提高整个方法的信噪比。在实验初期包被的抗原浓度需要少量0.2-1ug/ml，然后根据不同包被条件下同一样品信号大小来进行判断优化。一个已知亲和力的展示阳性抗体的噬菌体是十分有必要的，根据该阳性展示噬菌体样品的信号值来确定最终筛选过程中抗原的包被浓度。抗原直接包被酶标板材上会屏蔽部分结合位点，造成部分假阴性的结果，如果条件允许可采用生物素化抗原，首先5ug/ml的链霉亲和素包板，然后加入0.05-0.2 ug/ml不等的生物素化抗原。抗原直接包被和间接包被其效率不太一样，采用间接包被可适当降低生物素化抗原的包被浓度。Note3：在有生物素化抗原参与的ELISA实验中，不要加入含脱脂奶粉的封闭剂，脱脂奶粉含有微量生物素，会干扰整个检测体系。Note4：噬菌体上清液的稀释比例，可提前根据阳性噬菌体样品做好稀释预实验进行确定。Note5：应选择抗噬菌体的P8蛋白的酶联抗体，噬菌体有2000个以上的P8蛋白，适当的增加酶联抗体的浓度可以提高方法的灵敏程度，笔者曾增加5倍的酶联浓度得到了3倍的信号提升。Note 6：市面上TMB底物最低和最高有10倍的显色差异，建议选择市面上最强的TMB显色底物。需要提前确认检测仪器的信号线性范围，比如一般的酶标仪吸光度值的信号线之间为非线时，信号和亲和力的相关性变差。Note 7：显色时间可适当的延长，一般来说在30分中内显色的信号值和显色的时间成线：条件的选择最终是通过阳性噬菌体的信号值决定的，阳性噬菌体的亲和力大小是一个非常重要的选择参数。如阳性噬菌体的亲和力为1nM时，筛选的目的是得到高亲和力的抗体，可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为0.5时的条件作为最终的筛选条件，这样很多OD值很小的低亲和力的抗体均被过滤掉；筛选的目的是尽可能得到多的亲和力抗体，可以选择阳性噬菌体的信号在OD值为2-3时的条件作为最终的筛选条件，低亲和力的抗体在OD值上也不会太小，可以得到体现。不论如何抗原的浓度大小决定了选择性，选择较小的抗原浓度进行反应是信号和亲和力大小匹配的关键和趋势性选择，信号大小的调节可以通过酶联抗体浓度，高显色能力的显色液和显色时间进行调节。如果在一块板的检测中未知样品的信号值大小呈合理的分布是ELISA条件较好的表现。Part 4 - 总结 - ELISA用于杂交瘤和噬菌体展示筛选是ELISA用于亲和力测定方法的一种变种，想要得到好的信号和亲和力大小的相关性，低抗原浓度条件下进行方法学开发是必须的。低抗原浓度条件下会有低的信号值，通过增加酶联抗体浓度，选择高显色能力的显色液和延长显色时间，增加ELISA灵敏程度是ELISA优化的技术方向。由于检测样品的多样性和复杂性，高灵敏的ELISA检测体系必然会导致背景信号的增加，无法得到很好的信噪比，疏水性的酶标板条，尽可能低的样品的稀释倍数是解决这个问题的关键。一个稳健的能用于杂交瘤和噬菌体展示筛选方法是ELISA各种耗材，试剂和实验条件的完美组合，需要对试剂耗材的多种可能进行探索，也是平台经验的系统汇总，以下是用于筛选方法的优化方向的汇总。 以上，就是小奥带给大家的第四篇ELISA方法学开发的干货内容！我们下期再见哦！
令人意外！噬菌体携带抗生素耐药性基因根据一项新的研究，来自多种环境的病毒组携带着抗生素耐药性基因。这一结果提示着噬菌体---感染细菌的病毒---可能在转移让细菌产生耐药性的基因中发挥着作用。相关研究结果将发表在2017年1月那期Environmental Pollution期刊上，论文标题为“Exploring the contribution of bacteriophages to antibiotic resistance”。来自西班牙赫罗纳大学的研究人员扫描了来自未经净化的污水、人粪便、猪粪便、淡水环境和海洋环境的病毒组，以便寻找抗生素耐药性存在的证据。他们发现这样的基因存在于所有分析的病毒组中，尽管它们的丰度存在差异。在人类相关的病毒组中，研究人员发现相对较少的耐药性基因，它们中的大多数与四环素耐药性相关联。他们在其他的样品中观察到更加丰富的抗生素耐药性基因。在猪粪便病毒组中发现的绝大多数耐药性基因是编码β-内酰胺酶的基因，而未经净化的污水、淡水和海洋样品携带许多各种不同的耐药性基因，包括那些赋予对至少三种不同的抗生素产生多药耐药性的基因。论文通信作者、赫罗纳大学加泰罗尼亚水研究所科学家José Balcázar写道，“我们的研究表明环境是一个巨大的噬菌体库，它们中的大多数携带着抗生素耐药性基因。”因存在细菌DNA污染，Balcázar和同事们排除了他们的病毒组数据中的一些数据。Balcázar也强调应更加深入地研究他的团队在人类相关的病毒组中发现的较低数量的耐药性基因。他写道，“还需更多数量的样品来证实这一观察结果。”Balcázar说，噬菌体在细菌之间转移耐药性基因的机制和噬菌体在基因转移中发挥多大重要的作用还需在未来的研究中加以阐明。
中国科学院南海海洋研究所研究员王晓雪团队建立了一种不依赖于噬菌体基因序列相似性的原噬菌体de novo预测新算法，集成分析流程的工具名为Prophage Tracer。9月22日，相关研究成果在线发表在《核酸研究》上。烈性噬菌体侵染细菌宿主后，大量繁殖，裂解宿主细胞释放子代噬菌体粒子。温和噬菌体则是进入宿主细胞内，将自身的DNA整合在宿主的基因组中，随着宿主细胞的复制而复制。这一过程称噬菌体的“溶原化”，整合在宿主基因组中的噬菌体DNA称“原噬菌体”（prophage）。特定条件能重新激活原噬菌体使其裂解宿主。研究发现在人、小鼠肠道以及珊瑚微生物组中溶原化的温和噬菌体比裂解状态更普遍。温和噬菌体的溶原-裂解转换是微生物生态领域的重要科学问题之一。温和噬菌体能和宿主形成长期共生关系，其整合切离等可以破坏或恢复宿主的基因正常功能，是宿主基因表达调控的重要途径。研究团队前期发现，希瓦氏菌的原噬菌体CP4So可以在低温诱导条件下发生切离，是细菌一种重要的适冷机制，且CP4So的切离受到宿主温度依赖性的H-NS磷酸化调控。因此，精确鉴定细菌中的原噬菌体及其插入位点对于研究温和噬菌体与宿主的共生关系至关重要。当前，鉴定原噬菌体的方法依赖于利用已知的噬菌体进行序列相似性检索。然而，噬菌体的基因组变异快，基于序列相似性检索方法较难发现未知类型噬菌体。此外，对噬菌体插入位点的预测不准确，较难区分原噬菌体携带的“cargo基因”和宿主基因的边界。为了解决上述问题，汤开浩等建立了一种从头预测原噬菌体的方法（如图）。该方法利用原噬菌体整合切离过程中会产生基因组结构变异基因组序列。这些序列隐藏在细菌基因组、转录组测序数据的reads中。研究建立重叠的序列比对方法，追踪和挖掘埋藏于测序原始数据中reads。只需甄别到1-2条reads便能精确定位原噬菌体（精确到单个碱基）。该方法不依赖于序列相似性，可预测未知的噬菌体。研究在珊瑚共附生细菌中鉴定到九个温和噬菌体，两个为新颖的温和噬菌体。研究工作得到国家杰出青年科学基金、国家自然科学基金水圈微生物重大研究计划、国家自然科学基金面上项目、国家重点研发计划等的资助。Prophage Tracer流程
AI来了，自动化真的来了。当文心一言还在全力“阻击”ChatGPT的时候，AI自动化实验室早已从小谱君对未来想象的文字中 跳进我们的世界 ，在我们身边 低调的运作了很久 。本文小谱君将带仪粉er们云参观两家 获奖的AI自动化实验室 。AI自动化实验室入选合成生物十大新品4月27日，中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所、深圳合成生物学创新研究院、深圳理工大学（筹）合成生物学院联合发布 2023深圳合成生物十大新品 ，这也是深圳首次发布合成生物十大新品。 现场亮相的十大新品包括：1、柏垠生物发布的重组贻贝蛋白原料2、中科欣扬发布的SYSTASE®SOD产品3、百葵锐发布的新型溶菌酶4、道生生物发布的天然色素染料生物合成—靛蓝5、瑞吉生物研发的冻干新型带状疱疹mRNA疫苗RH3156、赛桥生物发布的多功能细胞处理系统7、未知君发布的重组活体生物药产品8、 晶泰科技发布的基于AI和超大规模的自动化实验室集群解决方案9、循原科技发布的非粮碳源生物炼化平台10、倍生生物发布的低嘌呤起泡酒。小谱君注意到，由 深圳晶泰科技 推出的基于AI的自动化实验室集群解决方案位列其中。XtalDynamics™自动化系统这不仅是晶泰科技的荣誉，还是 AI自动化实验室及AI制药大趋势 的最好印证。今天小谱君就带大家来参观晶泰科技的两家自动化实验室： 上海药物研发中心 和 深圳实验与计算研发中心 。本文图片版权由晶泰科技所有未经允许，严禁转载使用上海药物研发中心自动化化学合成实验室晶泰科技上海药物创新研发中心位于上海自贸壹号生命科技园，研发中心内设晶泰科技自动化化学合成实验室。实验室拥有壮观的自动化工站集群，极大程度的解放了科学家的双手，让科学家发挥更多的创造力。下面我们就去这家实验室一探究竟吧：图源：晶泰科技官网，感谢供图1F核磁共振室6F合成实验区5F合成实验区分析实验室Prep-HPLC制备设备：Gilson GX-281系列、Shimadzu 20AP系列，Warers AutoP系列，配备二极管阵列紫外检测器和质谱检测器，均为全自动高压制备液相，流速范围1-150ml/min，可实现从mg到g级的样品分离纯化。5F合成实验区分析实验室：Prep-HPLC5F合成实验区分析实验室 LC-MS ：Agilent 1260+DAD+ELSD+6125B，Waters H.Class+PDA+ODA，Shimadzu 2030Plus+2020MS，标配Walkup软件全开放式送样平台。FA、TFA、NH4HCO3等多种不同流动相体系，2min、3min、5min、 10min等10余种不同分析方法，满足合成检测的不同需求。5F合成实验区分析实验室：LC-MS 5F合成实验区分析实验室：化合物库管理4F合成实验区4F合成实验区：实验记录区噬菌体实验室依托KingFisher和QPix搭建了噬菌体自动化panning和克隆挑选XpeedPlay™平台，整个平台的通量能达到人工的10倍左右。3F抗体实验区：噬菌体实验室 3F抗体实验区：细胞培养间整合了Hamilton工作站、协作机器人、自动化培养箱、堆栈和标签机，以解决杂交瘤在抗体发现中克隆挑选的痛点。3F抗体实验区：分子克隆实验室3F抗体实验区灭菌间3F抗体实验区公共实验平台Sartorius Intellicyt iQue3Cytiva Biacore 8K Plus下面我们来看看位于2F的 自动化实验区 ：2F自动化实验区人机结合模式的XtalDynamics™自动化系统现了化学合成实验过程的高度自动化和智能化，通过中心化的 智能调度系统远程操控数百台规模的自动化工站和AGV小车 ，可 7×24小时不间断运行 ，同时提升化学合成和物料传送过程的效率。人和机器系统之间通过ELN模式的界面进行交互，不同功能的自动化工站可以通过不同方式灵活配置组合成小的分区系统。2F自动化实验区高通量投料反应工作站自动化高通量地进行有机合成备料和合成反应过程，功能包含：机器人投料， 精密加粉，精密加液，恒温搅拌功能模块，开关盖模块。自动化高通量地进行有机合成备料和合成反应过程，功能包含：机器人投料、精密加粉，精密加液,恒温搅拌功能模块，开关盖模块。2F自动化实验区：数字化可视化LIMS系统数字化可视化LIMS系统： 智能化实验室调度与分析系统，包含ELN，LIMS，子系统（仿真，资源管理控制等功能模块）。长按识别二维码VR在线参观本文图片版权由晶泰科技所有未经允许，严禁转载使用深圳实验与计算研发中心2021年，晶泰科技实验与计算研发中心落址深圳福田河套深港科技创新合作区国际生物医药产业园二期。除了计算研发中心外，这里还设有 化学合成实验室 、 药物固态研发实验室 、 药物发现生物学实验室 、 自动化实验室等 ，以支持不同项目的实际需求。下面我们就接着去云参观这间实验室吧：图源：晶泰科技官网，感谢供图自动化实验室自动化实验室：控制室自动化实验室：备料区自动化实验室：人机交互货架自动化实验室：自动化合成区自动化实验室：自动化合成区自动化实验室：自动化固态化学区化学合成实验室 化学合成 实验室：试剂室 化学合成实验室：冻干室 化学合成实验室：溶剂 室 化学合成实验室：合成实验 室 化学合成实验室：合成实验 室 化学合成实验室：分析分离实验 室 生物实验室 生物实验室：蛋白表达纯化实验 室 生物实验室：细胞培养实验 室 生物实验室：生化实验 室 生物实验室：药代前处理实验室 生物实验室：LC-MS/MS 生物实验室：电生理实验室冷冻电镜实验室 晶泰科技现有电镜实验室面积150m2，配置来自ThermoFisher Scientific公司的Glacios 200千伏冷冻透射电子显微镜、Ceta-D探测器、Falcon IV直接电子探测器、Vitrobot冷冻制样系统等先进仪器设备。 冷冻电镜实验室：电镜主机间冷冻电镜实验室：电镜操作间冷冻电镜实验室：常温制样 间 冷冻电镜实验室：冷冻制样 间 药物固体形态研究实验室 药物固体形态研究实验室：结晶室 药物固体形态研究实验室：天平室 药物固体形态研究实验室：衍射室 药物固体形态研究实验室：衍射操作室 药物固体形态研究实验室：稳定性实验室 药物固体形态研究实验室：样品干燥室 药物固体形态研究实验室：色谱室 药物固体形态研究实验室：固态分析室长按识别二维码VR在线参观本文图片版权由晶泰科技所有未经允许，严禁转载使用晶泰科技和他们的自动化实验室产品晶泰科技自2019年开启探索自动化实验室的自主研发之路，已成功开发XtalDynamics™自动化系统、SynArt™智能合成工作站、CrysArt™自动化结晶工作站，并已在自动化化学合成、固态研发等场景中成熟应用。采用人机结合模式的XtalDynamics™自动化系统实现了实验过程的高度自动化和智能化， 通过智能调度系统远程操控百台规模自动化工站和AGV小车 ，同时提升实验过程和物料传送的效率。系统可 7×24小时不间断运行 ，并实时记录实验过程数据和结果，有效保证了实验记录的及时性、完整性、规范性和可追湖性。系统配置灵活，可按照客户场景需求分阶段搭建专属自动化实验室。自动化系统中包含：SynArt™智能合成工作站和CrysArt™自动化结晶工作站。SynArt™智能合成工作站自动化工作流程CrysArt™自动化结晶工作站自动化工作流程
3月15日，西陇科学股份有限公司连发两则公告，通过外延并购等凡是加速进军体外诊断领域。公告1：西陇科学股份有限公司(以下简称“公司”或者“西陇科学”)的境外孙公司Xi Long USA, Inc.(以下简称“Xi Long USA”)与Fulgent Therapeutics LLC(以下简称“Fulgent”)股东Ming Hsieh签订协议，约定Xi Long USA以自有资金22,564,700美元投资Fulgent，获得其中Fulgent 股东Ming Hsieh、Ray Yin、Hanlin Gao、Joe Roach转让的7905405股股票，并认购Fulgent新发行的D2类优先股7905405股。上述交易完成后，Xi Long USA将持有目标公司15,810,810股，占目标公司股份总数的15%。Fulgent公司是美国CLIA及CAP认证的临床分子诊断标准化基因检测服务机构，凭借基因大数据库和顶尖技术装备，向全球提供最全面的基因检测服务。在全试剂最权威的美国国立健康机构NIH的基因检测数据库系统上，Fulgent是提供基因检测数量最多的机构，服务遍及美国，加拿大，澳大利亚，欧洲，南美及亚洲多个国家和地区。Fulgent诊断也是全球最高应用下一代测序技术进行DNA测序及基因拷贝数分析的企业，并提供专业遗传咨询服务。公告2：西陇科学与深圳福金、福建金锵签订合作协议，公司出资5100万元人民币，深圳福金出资3000万元人民币、福建金锵出资950万元人民币共同设立福建福君基因科技有限公司(暂定名，具体以工商行政管理部门核准为准，以下简称“福君基因”或“项目公司”)，西陇科学持股51%。基因检测作为国家现在及今后一段时期内的重要发展方向，对于疾病的预防及诊断具有极为重要的作用，具有良好的市场前景与发展空间。西陇科学公司通过一系列的投资方式，学习先进技术，借鉴先进经验，不断缩小公司与国际行业巨头的差距。以上对外投资业务也是西陇科学实施战略转型的重要步骤之一，公司通过对外投资，突破现有的体外诊断试剂业务类型，向更前沿的基因检测领域推进，对公司形成完整的体外诊断试剂产业链，提升公司在体外诊断试剂领域的竞争力有重要作用。关于西陇科学西陇化工创立于1983年，于2008年12月通过股份制改造为“西陇化工股份有限公司”，是一家集科研、生产、销售于一体的专业化学试剂供应商。系“国家火炬计划重点高新技术企业”、“中国优秀民营科技企业”，2007年被评为“广东省首批五十家科技创新型试点企业”之一，2008年被国家科技部评为“国家第二批创新型企业”。2011年6月2日，中小板公司西陇化工(002584)上市。12月9日，西陇化工发布名称变更公告，公司名称由西陇化工股份有限公司变更为西陇科学(002584)股份有限公司。
创伤弧菌的培养特性与生长环境及感染途径！ 创伤弧菌（vibrio vulnificus），或称为海洋弧菌，是一种栖息于海洋中的细菌。如果伤口暴露在含有这种细菌的海水中，创伤弧菌会在伤口上繁殖，可能引发溃烂，甚至导致组织坏死。若食用了遭污染的海鲜，也有罹患肠胃炎的可能。在2003年12月，中国台湾卫生研究院主导的基因体定序团队，完成了创伤弧菌的基因体定序与分析工作。 一、形态特性 创伤弧菌属革兰氏阴性弧菌。在液体培养基中菌体大小为0.7*2-3μm,稍弯曲。在固体培养基中呈多样性。有极端单鞭毛。 二、培养特性 营养要求一般，最适生长温度为30℃，兼性厌氧。在无NaCl及超过8%NaCl的培养基中不生长，可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生长，在含6%NaCl的蛋白胨水中生长良好。 三、流行病学 创伤弧菌广泛分布在海水中，可从牡蛎等海产品中分离得到。本菌主要通过伤口接触海水造成感染，也可经口感染。 经伤口感染时可导致蜂窝织炎及骨髓炎等多种炎症，经口感染时常迅速导致菌血症或败血症。 感染本菌后如不及时治疗，病死率很高。 四、临床表现 感染后的症状包括呕吐、发烧、腹泻、低血压、肿胀和疼痛等，需要尽快使用抗生素治疗。 若感染此弧菌，临床最常出现的两种表现为伤口感染以及原发性败血病。如果伤口接触到海水、贝壳或鱼类，便有可能感染到此弧菌。一般来说这样的感染多半很轻微，但在高风险的族群上，此类弧菌感染可以很快速的传播，并导致严重的肌炎和肌膜炎引发严重的坏疽。 五、感染途径 美国佛罗里达海滨爆发“吃人肉细菌”致死率超过30%，引起人们的极大关注。据悉，感染吃人肉细菌后，会发生呕吐、发烧、腹泻、低血压、肿胀和疼痛等症状，另外，吃没有煮熟的贝类（如牡蛎）也可能造成感染。 这种名为创伤弧菌(Vibriovulnificus)的细菌可通过人体表面伤口，或者是游泳者吞咽海水而进入人体内繁殖作乱。 虽然多数游泳者不会受上述细菌影响，可一旦感染，患者体表伤口附近的肌肉组织将被细菌“杀死和吃掉”。免疫系统功能低下的人（如肝肾功能不全者）最容易感染这种致命的细菌。另外，吃没有煮熟的贝类（如牡蛎）也可能造成感染。 其实海产品很易受副溶血型弧菌以及其他致病性弧菌的污染，根据2003年中国部分沿海地区零售海产品中副溶血性弧菌污染状况的主动监测，38．6%的海产品检出VP（副溶血性弧菌），浙江省试样的VP阳性率最高。甲壳类、贝类和鱼类试样VP阳性率分别为49．3%、37．9%和25.5%，生食海鲜尤其不推荐。 当被虾枪刺伤以后，伤口小而深，创口不容易暴露，也就不容易冲洗干净，在这个相对封闭的小环境里，海鲜上携带的创伤弧菌会趁虚而入，积累到一定数量，就会伺机入血，形成菌血症 。在免疫细胞的攻击下，细菌裂解释放出脂多糖LPS，LPS会引起免疫细胞释放细胞因子，如肿瘤坏死因子、白细胞介素6，甚至引起细胞因子风暴，导致败血症性休克。由此可能会引起重要脏器如脑干血液灌注不足，严重甚至可导致死亡。 六、生长环境 创伤弧菌和嗜水气单胞菌是海洋中最常见的弧菌科细菌，广泛分布于近岸海域的海水、海洋生物的体表和肠道中。其中，海洋弧菌是海水和许多海洋生物的正常或有益菌群成员，有许多海洋弧菌是养殖虾类和鱼类的重要病原菌。 创伤弧菌大多生长在热带及亚热带的海洋地区，且自然生存于河海交界处，需要一定盐分（0.7%～1.6%）和适宜的温度（20～40℃）才可生长。人感染创伤性海洋弧菌和海水污染无关。 所致感染多在夏秋两季，一方面夏秋季水温较高，适合海洋弧菌的生长和繁殖；另一方面，人们和海洋接触的机会增加，感染的风险增加。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！
12月17日消息，今日国药集团确认已于15日正式签约投资控股现代阳光体检公司，这是央企首度进军体检业，行业面临洗牌。据悉，国药健康产业部负责人此前曾任慈铭健康体检集团北京公司副总经理。国药集团在市场上以并购见长，2011年通过不断并购，国药集团成为国内第一家营业收入超千亿的医药企业。国药集团今年开始发力健康管理服务产业，不久前投资控股了“1健康网”，将其建设成为销售保健品的网络平台，近日又并购了一家连锁体检公司。据国药集团相关人士介绍，国药集团正在全力推进医疗健康产业平台建设，集医疗健康服务管理、健康产品和电子商务为一体，国药集团控股现代阳光之后，将成为国内体检行业中唯一一家央企，争取成为全国最大的健康服务机构。这一目标的实现必然会引发国内体检行业洗牌。体检连锁行业竞争激烈，除公立医院的内设体检机构外，近几年发展起来的慈铭体检、美年大健康、爱康国宾、九华体检、瑞慈体检等公司各占据一定的市场份额，慈铭、爱康国宾等体检机构曾获得多轮PE/VC投资，其中慈铭体检号称“亚洲规模最大、体检量世界第一”。据了解，控股完成后现代阳光的发展将纳入国药集团旗下中国国际医药卫生公司(简称国药国际)的统一规划中。国药国际健康产业部负责人张险峰此前曾担任慈铭健康体检集团北京公司副总经理，未来将负责现代阳光的战略规划业务。张险峰透露现代阳光下一步的发展重点有五大方面，其中第一步就是扩张网点，将通过自建、合建多种模式实现网点扩张，争取成为规模最大、服务网点最多的体检机构。此外还将拓展业务，提升质量，加强品牌宣传，重视研发工作。目前国药集团与现代阳光双方拒绝对外透露具体投资细节，张险峰表示：“只能说这次投资以增资为主，增资后国药实现控股地位，投入的资金将用于阳光下一步的发展。”现代阳光官方网站介绍，公司于2004年在全国开展连锁加盟，目前已在北京、广州、长沙、杭州、深圳、武汉等多个城市建立了旗下健康体检连锁机构，以每年300%的增长速度发展。
日本产业技术综合研究所8月2日宣布，该所的一个研究小组发明了一项精密测量运动物体形状的新技术，可用于运动姿态研究和材料分析等领域。研究小组将边长5毫米至1厘米的大量方格图案光标投影到被拍摄物体上，利用每秒可拍摄2000帧画面的摄像机对身体部位的位置关系进行三维立体测量。利用这种新方法，可以掌握数万个测量点的位置关系，对人体运动时衣服褶皱和肌肉外形的变化都能精确测量，对于球体撞击墙壁时发生的形状变化也可以立体测量。研究小组带头人佐川立昌说，这一技术有望在开发运动类数码游戏和分析运动员的肢体活动状态等领域得到应用。
仪器信息网讯 2021年1月21日，化学领域国际顶刊《Journal of the American Chemical Society》刊登了东京大学研究团队题为“Capturing the Moment of Emergence of Crystal Nucleus from Disorder ”的研究成果，该成果基于团队一位硕士研究生捕捉到的原子分辨率视频，首次实时拍摄了盐晶体形成的原子分辨率视频，为研究了几个世纪的成核过程理论，首次从原子水平给予实验室验证。论文链接：DOI: 10.1021/jacs.0c12100在一个振动的碳纳米角中生长的氯化钠晶体两项新技术——原子分辨率实时视频和锥形碳纳米管约束技术——帮助研究人员可以看到以往从未见过的晶体形成细节。这些观察证实了关于盐晶体如何形成的理论预测，并可以为一般的理论提供依据，即说明晶体形成如何从无序的化学混合物中产生不同有序结构。我们生活中，身边的晶体随处可见，如雪花、盐粒甚至钻石。它们由分子的规则和重复排列而组成，而这些排列都是从这些分子的混乱无序的“海洋”中生长出来。从无序状态到有序状态的生长过程被称为成核，尽管已经研究了几个世纪，但直到现在，在原子水平上的确切过程从未被实验证实。仅仅能够在原子水平上看到分子是不够的——这种能力已经存在了几十年。晶体的生长是一个动态的过程，观察它的生长与观察它的结构一样重要。幸运的是，东京大学化学系的研究人员用他们的单分子原子分辨率实时电子显微镜技术(SMART-EM)解决了这个问题。ZH这项技术以每秒25张图片的速度捕捉化学过程的细节。“我们的一名硕士学生，Masaya Sakakibara，使用SMART-EM来研究氯化钠盐的行为，”项目助理教授Takayuki Nakamuro说，“为了将样品固定在合适的位置，我们使用了原子厚度的碳纳米角，这是我们之前的发明之一。随着Sakakibara拍摄的令人惊叹的视频，我们立即注意到有机会以前所未有的细节来研究晶体成核的结构和统计方面。”298k条件锥形CNT中NaCl的九次结晶视频截取(0-44.40 s)。实验条件为:加速电压80 kV，电子剂量率4.0x105 e - nm-2 s-1，每帧曝光时间40毫秒，视频的回放速度与原始录像相同。298k条件锥形CNT中NaCl的九次结晶视频截取(44.44 - 88.84 s)298k条件锥形CNT中NaCl的九次结晶视频截取(88.88 - 133.28 s)Nakamuro和他的团队观看了Sakakibara捕捉到的视频，他们是有史以来第一批看到由几十个NaCl分子组成的微小长方体晶体从分离的钠离子和氯离子的混乱混合物中逐渐形成过程的人。他们也立刻注意到晶体出现频率的统计模式，该模式遵循众所周知的正态分布，这一结果早已被理论化，但直到现在才被实验证实。Eiichi Nakamura教授说:“盐只是我们探测成核基本原理的第一种模型物质。盐只有一种结晶方式。但其他分子，如碳，可以以多种方式结晶，形成石墨或钻石。这就是所谓的多态性，目前没有人看到导致多态的核形成的早期阶段。我希望我们的研究为理解多态性的机制提供了第一步。”氯化钠结晶过程研究该团队的研究成果意义将不仅限于石墨、钻石等，晶体生长中的多态性也是许多制药和电子元件生产中的重要过程。附：关于实验使用的原子分辨率透射电镜原子分辨率透射电子显微镜(TEM)观察是在JEOL JEM-ARM200F仪器上进行的，该仪器配有像差校正器(点分辨率为0.10 nm)，在298和473 K, E = 80 kV加速度下，在1×10–5 Pa的样品柱中，实验采用1~3 μm的球差(Cs)值和电子剂量率(EDR 每秒每nm2电子数每)为2.0×106–1.0×107 e–nm–2 s–1 (200万倍放大)。在298 K以25fps（每秒帧速率）或在473 K以50fps的帧速率连续记录一系列图像， CMOS相机(Gatan OneView,原位模式,4096×4096像素)在binning 2模式下运行（输出图像大小：2048×2048像素，像素分辨率0.01nm，200万倍）和binning 4模式(输出图像大小:1024×1024像素,像素的分辨率在0.02 nm，200万倍)。所有图像都在Gatan DigitalMicrograph软件上自动处理。为了记录样品的原子分辨率视频，研究者首先在100,000倍的网格上观察整个碳纳米管团聚体，寻找适合仔细分析的锥形碳纳米管。为了深入分析，研究者将放大率提高到200万倍，并开始录像。在图像采集过程中调整了散焦值。图像记录在欠聚焦条件下(散焦值:10 - 20nm)。使用Gatan DigitalMicrograph软件，以.dm4格式录制。日本电子 JEM-ARM200F 透射电子显微镜Gatan OneView 数字成像系统
2023年3月17日经国家市场监督管理总局（国家标准化管理委员会）批准发布GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》系列标准，代替实施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活饮用水标准检验方法》。新标准将于2023年10月1日起正式实施。 GB/T 5750-2023标准历时5年，经过了3轮意见征求，有280+单位参与研制与验证，有超过500名行业专家参与的GB/T 5750修订工作，最终大功告成。本次修订微生物指标主要内容：新增肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌两个检测指标、3种检测方法和增加菌落总数酶底物法新方法。其中产气荚膜梭状芽孢杆菌是新增检测指标，有些老师不清楚检测过程中需要用到哪些设备，我们根据标准的要求做个简单介绍。根据标准要求我们需要准备以下仪器和耗材：1. 电子天平：实验室常用仪器2. pH计或精密pH试纸：实验室常用仪器或耗材3. 恒温培养箱：实验室常用仪器4. 冰箱：实验室常用仪器5. 恒温水浴箱：实验室常用仪器6. 显微镜：实验室常用仪器7. 无菌吸管：实验室常用耗材或仪器8. 无菌试管：实验室常用耗材9. 无菌平皿：实验室常用耗材10. 厌氧培养装置：华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统11. 过滤设备：华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置12. 滤膜:实验室常用耗材13. 无齿镊子：实验室常用耗材其他会用到的设备：HD-C系列菌落计数仪、HD-DT系列自动样品稀释仪、HD-GM系列全自动革兰氏染色仪、HD-S系列自动培养基分装仪、HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统产气荚膜梭状芽孢杆菌检测流程图一、 样品1. 污染较轻的水样，可直接取100 ml水样进行检验。2. 污染严重的水样，可使用0.1%缓冲蛋白胨水将水样按10倍系列稀释，取100ml进行检验。使用华端生物HD-DT系列自动样品稀释仪：自动称重，自动按比例稀释。二、 过滤水样先用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将滤膜正面朝上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100 ml水样注入滤器中，打开滤器阀门，在-5.07X104Pa(-0.5 个大气压)下抽滤。每次试验均需要用100 mL0.1%缓冲蛋白胨水讲行空白对照。使用华端生物HD-F系列水中微生物膜过滤装置：配备直排泵，无需废液瓶，直排废液；火焰灭菌支架和滤杯，提高实验效率。三、 厌氧培养过滤完水样后，关上滤器阀门，取下滤器，用无菌镊子夹取滤膜边缘部分，移滤膜倒置在SPS琼脂培养基上，滤膜截留细菌面与培养基完全贴紧，避免气泡产生，然后将平皿倒置于厌氧培养装置内，于36℃±1℃厌氧培养18 h~24 h，计数黑色菌落数。使用华端生物HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统：使用灵活、成本低，培养效果有保障，操作简单、智能。四、菌落计数对滤膜上证实为产气荚膜梭状芽孢杆菌的菌落进行计数使用华端生物HD-C系列菌落计数仪：手动菌落计数器辅助计数，操作方便；全自动菌落计数仪：软件自动计数，计数快捷、准确。五、 细菌鉴定用上述培养液涂片，革兰氏染色、镜检。产气荚膜梭状芽孢杆菌为革兰阳性粗大杆菌，其耐热菌株可能形成卵形芽抱,位于菌体中央或近端，其宽度一般不超过菌体宽度。使用华端生物HD-GM系列全自动革兰氏染色仪：自动化的染色仪使革兰氏染色实验自动化、标准化，批量大时可节约大量时间。使用华端生物HD-MA系列自动微生物生化鉴定系统：标准化的试剂操作，仪器自动判读结果，避免人工判读偏差。六、其他仪器使用华端生物HD-S系列自动培养基分装仪：自动分装培养基或者其他微生物试剂，方便、快速。使用华端生物HD-M系列微生物质谱快速鉴定仪：相比传统鉴定方式更快出结果、准确性更高、操作更简单、检测范围更广。杭州华端生物科技有限公司创始团队十多年来一直专注于为用户提供有竞争力的食品、药品、医疗及科研微生物实验室的整体解决方案与服务。2021年我们开始运营品牌“华端生物”，品牌寓意中华之端，华端人不断创新研发，提升产品竞争力，打造新国货。在企业发展过程中，我们始终秉持这一理念，不断引进、培养高科技人才，加大研发力度，并通过对产品持续创新、服务坚持初衷和团队共同成长的持续投入，不断推出符合市场需求的解决方案和服务。我们坚信，“更好的产品、更好的服务和更好的团队”是我们能够赢得客户青睐的核心竞争力，我们会始终不忘初心、砥砺前行，实现“与客户共同保障食品安全、药品安全和公共卫生安全”的社会使命。以史为鉴、开创未来。杭州华端生物科技有限公司诚挚期待与广大用户深入交流，与想要加入团队共同奋斗的同仁，携手前行，共创美好未来。核心价值观：拼搏、专注，突破、创新！企业愿景：提升国产微生物检测设备的竞争力！公司使命：为食品、药品和公共卫生安全提供保障。
p style=text-align: justify text-indent: 2em SEMI报告指出2019年全球半导体制造设备销售总额为598亿美元，虽年减7%，但中国台湾稳坐去年全球半导体新设备的最大市场，销售额年增达68%、高达171.2亿美元。SEMI进一步指出，2019年全球晶圆处理设备销售额下降6%，其他前段设备销售额则出现9%的增长。组装、封装以及测试设备的销售表现也不如预期，分别下降了27%和11%。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 在半导体制造设备销售发生变化的背后，都反应了哪些市场信号？/ph3 style=text-align: justify text-indent: 0em 中国台湾半导体设备年增长68%/h3p style=text-align: justify text-indent: 2em 根据SEMI报告显示，去年当中，中国台湾半导体设备销售额年增达68%。是哪些企业在支撑着这种惊人的增长率？/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 提到台湾半导体产业就不得不想到它强大的代工产业。台积电是其中的龙头企业，占据着晶圆代工的榜首。2019年9月，台积电就曾发布公告称，公司向应用材料等公司订购价值新台币56.68亿元（约合人民币13亿元）设备。台积电未披露订购机器设备具体名称。但根据市场中所透露的消息来看，其交易对象包括应用材料，ASML以及Lam Research等。尤其是单机售价超过一亿美元的EUV光刻机，更是中国台湾半导体设备支出创新高的重要因素。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 但根据台积电2019年全年的资本支出来看（140亿美元到150亿美元之间，这其中还包括一些非半导体设备的支出），台积电显然不能凭一己之力，擎起中国台湾半导体设备达到171.2亿美元。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 作为台湾代工产业的另一个巨头，全球最大砷化镓晶圆代工服务公司稳懋半导体也在去年迎来了其营收历史高点。受惠于去年智能手机市场状况的改变及客户的强劲需求，稳懋2019年的折旧约较2018年增加了一成，资本支出也达到了60亿元。公司表示，这笔资金主要均投入在采购设备以及扩充产能，借此纾缓旺季时，产能供不应求的缺口。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 除此以外，去年，封测大厂日月光也在机器设备上进行了大量的投入，据相关统计数据显示，其在机器设备上资本支出达到了15.75亿美元。其中，封装业务上的投资为7.98亿美元，测试业务为6.89亿美元，其余则用于电子代工服务业务以及互连材料业务等。/pp style=text-align: center text-indent: 0em img style=max-width:100% max-height:100% src=中国台湾作为全球领先的晶圆代工厂台积电的所在地，也是全球OSAT龙头日月光集团的总部。在当前往新制造工艺和和新封装技术备受关注的当下，这个数据可以反映出了他们对先进技术的追逐。换个角度看，这也是他们能够多年来稳坐这两个领域冠军的原因。/ph3 style=text-align: justify text-indent: 0em 国内半导体形势火热，带动设备增长3%/h3p style=text-align: justify text-indent: 2em 关于中国大陆的半导体设备销售。根据SEMI官方的数据，2018年，中国大陆的半导体设销售额达到了128亿美元，同比增长56%，约占全球半导体设备市场的21%，是当年仅次于韩国的全球第二大半导体设备需求市场。按照他们在2018年六月的预测，2019 年，中国半导体设备市场价将再次增长57%。到了2018年年底，SEMI调整了他们的预测，他们认为中国大陆半导体设备市场在2019年将会成长46.6%，而这将帮助中国大陆成为全球最大的半导体设备市场。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 从SEMI的报告中可以看到，他们认为国内的的晶圆厂设备增长，主要是来自国内在大型半导体制造项目方面的投入。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 但到了2019年年中，SEMI表示，由于智能手机和数据中心的半导体需求低迷，导致了一些厂商降低了对设备的投资。这也让他们修正了之前的预测。他们表示，在2019年，全球的半导体设备销售额会较2018年下跌18%。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 来到中国大陆方面，除了外商对市场的不看好，还有一部分就是国内新增晶圆厂的进展。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 根据芯思想研究院所公布的2019年中国63座晶圆制造厂最新情况跟踪数据显示，在这63个项目当中，其中6个项目已经停摆。其余的57个项目中（包括硅基项目和化合物项目），有13个处于投产阶段，有18个处于产能爬坡阶段，还有18个处于在建阶段，此外的还处于规划阶段。在这些项目当中，并不是所有项目都处在了进行半导体设备支出的阶段。因此，有一部分项目并未在半导体制造设备销售上做出贡献。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 再者，由于去年闪存价格的大跌，也一定程度影响了三星、SK海力士和英特尔这些厂的投资规划（这些企业都在中国大陆建立了生产工厂）。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 另外，由于2018年，中国大陆方面已经在半导体制造设备上进行了超过130亿美元的投入，由于基数比较大，因此，在年增长率上这个数字并不如中国台湾那样夺目。但从2019年中国大陆在半导体制造设备上的整体投入上看（134亿美元），中国大陆半导体制造业务仍具有较大的活力。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 但在这种信号的背后，我们也应该清醒地认识到，中国大陆晶圆厂在先进工艺上还处于追赶的阶段，在先进的逻辑工艺上面也存在着客户缺失的问题，这也导致中国大陆晶圆厂在计划进行产能扩展，尤其是在对高价的EUV购买上，屡受掣肘，这也是国内在半导体设备上表现欠佳的又一个原因。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 由此我们可以看到，晶圆厂，尤其是先进工艺对于整个半导体供应链的影响力。这也是我国必须，也义不容辞发展本土先进工艺的一个原因。/ph3 style=text-align: justify text-indent: 0em 北美晶圆制造设备销售额大增，靠谁？/h3p style=text-align: justify text-indent: 2em 在SEMI的报告中，除了中国大陆、中国台湾等地区出现了半导体制造设备销售额增长的情况，北美地区也出现了增长的态势，并较2018年有了40%较大幅度的增长。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 在北美地区当中，尤属美国在半导体制造领域表现得强劲。根据半导体行业观察此前的报道显示，近半数美国半导体公司的制造基地都位于美国（这些企业大多属于IDM模式），其中有19个州是主要半导体制造工厂或“晶圆厂”的所在地，据SIA统计，这19个州中有34个企业建有70个工厂，企业主要包括博通、microchip、英特尔、安森美、Qorvo、ADI、Maxim、美光、X-FAB、TowerJazz、TI、MACOM、Skywater等。而其中英特尔应该会是他们的一大动力来源。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 相关资料显示，英特尔的14nm产能从2018年Q3季度开始就出现了供不应求的情况，为此，英特尔也为14nm产能的提高，做出了多项措施。根据相关报道显示，在2019年的前三个季度，英特尔就花费了115亿美元资本支出来购买新生产设备。但这些设备不仅仅用于只英特尔美国的半导体制造工厂，还包括位于其他地区的工厂。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 同时，第三代半导体器件需求量的前景也被业界很多企业所看好，因此，在这方面上，也或许有相关企业在针对这个方面在设备上有所投资。新兴领域或许也是驱动北美这些IDM企业对半导体制造设备需求上涨的因素之一。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 但其实我们看到，美国的半导体设备市场与排在前面的中国大陆、中国台湾和韩国相比，还是有一定差距，这与他们这些年的发展模式有关。/ph3 style=text-align: justify text-indent: 0em 韩国存储投资扩产大减？/h3p style=text-align: justify text-indent: 2em 除了上述地区出现了增长以外，还有一些地区的半导体制造设备销售也出现了负增长。这其中就包括了韩国。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 韩国在存储产品上的实力毋庸置疑。但因为去年存储市场受到了周期性变化的影响，使得这个市场出现了下滑。根据闪存市场之前的报道显示，据韩国海关总署（KCS）数据显示，截止至去年2月，用于制造半导体设备和电子集成电路的机器和设备的进口额仅为9.3亿美元，与去年同期相比下滑70.63%。三星电子和SK海力士等半导体芯片制造商的采购放缓是半导体设备进口下降的主要原因。业内观察人士表示，“三星电子和SK海力士在半导体设备制造商的新设备投资中占90％。2019年，由于存储器库存积累，他们将不得不放缓购买设备。”/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 根据相关报道显示，SK海力士在其第二季度财报会议中曾表示，公司计划在2019下半年将位于首尔以东的利川M10工厂的部分DRAM工厂生产线转换为CMOS图像感测器（CIS）生产线，就是将DRAM产量降至明年。对于最近NAND价格稳定，SK海力士2019年晶圆投入将减少15％以上，而之前计划是将其减少10％。此外，三星也有规划将2条DRAM产线条CIS芯片产线条DRAM生产线转为生产CIS芯片。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 另一方面，也许是因为三星和台积电在7nm工艺实现的不同选择，导致了三星在推出7nm上的时间节点上慢了一步，其早期的产品表现不尽如行业预期。这或许也是在过去两年中，韩国和中国台湾在半导体设备市场出现冰火两重天情况的一个重要诱因——三星在第一代7nm就导入了EUV工艺，这也是让他们2017年半导体设备投资较之2016年暴增133%的原因；同期，中国台湾的设备投资则减少了6%。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 三星和台积电之间在先进制程上的布局竞争，也深刻地影响了其所处地区半导体设备销售的变化。我们看到，在韩国遭遇存储产业遇冷之后，同时，其代工业务也还处于成长阶段，在这两种因素的影响下，导致了他们在2018和2019都是负增长。而反观中国台湾，他们在2018年负增长12%之后，在2019迎来了反弹。/ph3 style=text-align: justify text-indent: 0em 欧州日本半导体制造的衰落/h3p style=text-align: justify text-indent: 2em 同样，出现半导体制造设备销售额下跌的，还有欧洲和日本地区，根据SEMI的报告显示，这两个地区的跌幅分别为46%和34%。而从近些年来，欧洲和日本的半导体制造产业发展的情况中看，这种结果并不令人惊讶。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em IC insights曾有报告指出，自2009年以来全球已关闭或改建的晶圆厂有100座，其中日本关闭了36座，这比任何其他国家/地区都多。日本半导体企业也主要是以IDM模式进行运营。伴随着存储市场的迁移，日本仍然坚守着原始的IDM模式，没有完成向无晶圆厂或轻晶圆厂模式的转变，这也使得他们需要在市场受到挤压的情况下，面临着成本的压力。而这种压力也压垮了不少日本晶圆厂。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 据《日经亚洲评论》报道，2019年松下电器宣布将其亏损的半导体业务出售给中国台湾的科技。报道指出，松下还将分拆与以色列Tower半导体合资的TowerJazz松下半导体（jazz Panasonic Semiconductor）旗下的三家日本芯片制造工厂。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 而谈及欧洲半导体产业的时候，我们也不难发现，这片土地培养出来了许多半导体巨头，包括英飞凌、意法半导体以及NXP等。或许也是受到了成本的压力，这些公司也开始走向轻晶圆厂模式，在这种情况下，在过去的十年当中，这些企业也多多少少地出售了他们旗下的晶圆厂。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 但在如今贸易形势的影响下，欧洲半导体企业也开始重视在他们自己的地盘中新建半导体生产线。据路透社报道，欧洲半导体产业正请求欧盟提供更多的援助。该产业正寻求在试探性复苏的基础上取得进一步的发展，拥抱人工智能等技术，并克服威胁全球供应链的贸易战带来的不利影响。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 根据路透社的报道显示，欧盟数字事务专员玛丽亚?加布里尔（Mariya Gabriel）曾提交了一份20页的报告，要求在欧盟未来7年的预算期内，将2014年启动的一项研发项目的投资规模增加一倍，至100亿欧元（约合117亿美元）。2019年，德国的英飞凌公司宣布将在奥地利的菲拉赫建造一座耗资 16 亿欧元的工厂，这将是英飞凌第二家能够在 300 毫米芯片上制造芯片的工厂。如果这项援助得到批准，或许，欧洲半导体企业将会凭借其在IDM模式中积累的技术，也能在制造业上迎来新的发展。/ph3 style=text-align: justify text-indent: 0em 结语/h3p style=text-align: justify text-indent: 2em 从半导体制造设备的销售情况上看，Logic、Foundry以及Memory已经成为了半导体产业中十分重要的三个领域。而从销售总额的分布上看，轻晶圆厂模式似乎已经成为了半导体制造的主流模式，代工厂在半导体产业中地位越来越高。在这种趋势下，半导体制造的相关设备也流向了代工产业比较发达或者正在发展地区，包括了中国台湾和中国大陆。/pp style=text-align: justify text-indent: 2em 同时，我们也看到，在贸易环境不确定的条件下，有一些IDM企业也开始有意识地开始发展自己的半导体制造产线。这或许也将成为半导体设备企业的另一个业绩成长空间。/p
变异链球菌的菌落特征与使用范围及培养方法！ 变异链球菌属于甲型溶血性链球菌类，菌体较小，呈圆形或卵圆形，常成双或以短链状排列，革兰染色呈阳性。它在胰蛋白胨培养基中和含有95％氮气及5％二氧化碳混合气体的环境下生长良好。 一、菌种简介平台编号：Bio-53150规格：冻干物拉丁属名：Streptococcus Mutans菌株名称：变异链球菌其他编号：ATCC700610培养基编号：116或114,5% CO2 or 厌氧培养温度：37培养时间：48 小时用途：对红霉素、利福平、利福霉素AMP、壮观霉素、链霉素敏感。血清型C。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。甘油请置于-80°C。 二、培养基TSA+5%脱纤维蛋白羊血（血琼脂平板） 三、菌落特征变异链球菌在血平板培养基上呈旺溶血，菌落较小，呈灰白色、圆形，表面突起，菌落质地较硬，有嵌入培养基内生长的趋势。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件。
